谈糖不色变
多聚脱氧核糖核苷酸(PDRN)科学解读
从伤口愈合到护肤抗衰 一篇读懂完整研究脉络
2026年07月09日 13:52
多聚脱氧核糖核苷酸(Polydeoxyribonucleotides,简称为PDRN),由多个脱氧核糖核苷酸单体组成的聚合物,是从三文鱼精巢中提取的极少量再生物质。PDRN,是一种大分子的核酸类物质,具有大分子物质的特性,如高分子量、强吸水性及良好的生物相容性等。
2008年,韩国药监局KFDA通过PDRN用于组织修复和皮肤移植创伤的治疗。PDRN之前已经被批准在意大利临床使用,作为组织修复刺激剂;官方申明,旗下的Placentex-PDRN属于处方药,PDRN含量为5.625mg/3ml,相当于0.2%浓度,用于伤口治疗、骨骼软组织再生。PDRN还可添加于滴眼液产品中,用于治疗结膜和角膜营养不良、隐形眼镜所致的微创伤和瘢痕;应用于骨科产品,可通过关节内注射通过物理恢复减少关节机械摩擦;还可用于治疗皮肤和结缔组织营养不良或营养不良-溃烂性疾病等。
PDRN可以改善皮肤状态,缓解皮肤老化。因此,PDRN在皮肤美容方向的应用越来越广。PDRN美塑已成为韩国皮肤门诊、整形外科最热门的技术之一,在水光产品、filler产品中广泛应用,用于改善皱纹、修复屏障、抗炎、去痘印等。
PDRN的结构为线性聚合物,其分子量在50至1500 KDa之间,最具代表性的分子量为80-200 KDa。与其他DNA类药物相比,PDRN具有更高的分子量,而且PDRN在纯化过程中去除了至少95%的蛋白质和肽,保证了产品的安全性。
多聚脱氧核糖核苷酸的发现历程融合了民间智慧、科学意外与系统研究。
最早在15世纪,欧洲渔民长期用三文鱼精巢捣碎外敷处理伤口,发现能加速愈合(如挪威、意大利海岸),但缺乏科学解释。
1952年,科学发现关键突破,意大利Mastelli首次从海鳟鱼生殖细胞中成功提取出了一种物质,公司研究组在处理患者提供的未愈合创面样本时,意外将三文鱼精巢提取物混入实验体系,观察到破损的角质层硬度显著恢复;当时被误判为营养液渗透误差。
直到1959年,Mastelli公司确认三文鱼提取物中活性成分为低分子量DNA片段(即PDRN),可通过激活腺苷A2A受体促进血管生成与胶原合成。此后韩国等国家也陆续从鲑鱼或大马哈鱼的精子中提取出PDRN。
按结构形态可分为双链DNA (dsDNA)、单链DNA (ssDNA)及环状DNA。
按照结合的金属元素分,可分为DNA-钠、DNA-钾、DNA-镁、DNA-锌等。
按照水解程度分,可分为DNA和水解DNA。
PDRN子类按照来源可分为动物提取PDRN、非动物提取PDRN及生物合成PDRN。
PDRN按照分子量大小可分为高分子量PDRN、低分子量PDRN。
按照应用领域分类,可分为妆品级PDRN、药械级PDRN和原料药PDRN。
按照结构形态分,目前有链状PDRN和球PDRN。
目前,多聚脱氧核糖核苷酸PDRN还未有纳入国际、国内、行业标准的定义和分类。
4.1 欧盟委员会COSING化妆品成分
4.2药典
4.3 其他描述及来源
PDRN 通常从鲑鱼的生殖组织或生殖细胞中提取获得的。目前,超过90%的商业化PDRN提取自鲑鱼精巢或鲑鱼精液。常用的鲑鱼品种有大西洋鲑(Salmon salar)、海鳟鱼(Salmo trutta trutta)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)或虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)。
选择三文鱼的原因:
(1)鲑鱼的DNA碱基组成与人类相似度高达98%,生物相容性极佳。鲑鱼生殖细胞提供高质量的不含药理活性蛋白和肽的 DNA,无免疫副作用,能保障其对组织修复、 抗缺血和抗炎等多种活性作用的安全性,通过受控的净化提纯工艺和高温杀菌工艺制备,其纯度可达到 95% 以上。
(2) 高生理活性:三文鱼生长于纯净冷水域,DNA片段完整度高;鲑鱼在深海高压环境中进化出极强再生能力,其生殖细胞富含高活性核苷酸。
(3)可持续养殖:可建立专属养殖基地,确保原料安全可控;量产稳定且符合伦理。
近年来,随着合成生物学与人工智能技术快速发展,PDRN研发进一步迈向精准设计阶段。不同于传统依赖天然提取或发酵筛选的方式,合成生物学通过AI辅助序列设计、微生物表达、及体外功效评价等技术路径,对具有目标活性的DNA序列进行理性设计和优化,使PDRN研发逐步从"天然混合物"向"精准设计分子"转变。
这一技术路线有望实现目标序列明确、分子结构可设计、生产过程无动物来源,并依托发酵体系实现更加稳定、绿色和规模化的生产,为PDRN原料创新提供新的技术方向,也推动产业从传统提取模式迈向精准生物制造时代。据悉,华熙生物在合成生物学来源PDRN领域已取得重要技术进展,推动PDRN原料研发从传统提取模式向更加精准、绿色、可控的生物制造模式迈进。
近年出现非动物源替代品,例如:小球藻(山东省循证医学研究院)、清酒乳杆菌(华熙生物专利技术)、褐藻及玫瑰(兰蔻等品牌研发);还有其他来源,如人胎盘、红藻、中华鲟、绞股蓝、海参、海星、人参等,因伦理或技术限制使用较少。
目前已证明 PDRN 在治疗浓度下可提高原代培养物中成纤维细胞、软骨细胞、前脂肪细胞和成骨细胞等多种细胞的生长速率,并具有抗炎、抗骨质疏松、抗凋亡、抗黑色素形成以及促进胶原再生、血管生成等多种效应。因此,PDRN在骨质疏松、皮肤溃疡、肌腱损伤、等疾病中得到应用外,PDRN 已运用到再生医学领域和医疗美容领域。
1.1皮肤再生与伤口愈合
在皮肤修复与美容行业中,PDRN 技术获得了广泛的应用。近期,“婴儿针”这一新兴医美项目,紧随水光针和童颜针的脚步,在美容界掀起了一股热潮,其核心成分便是PDRN。由于 PDRN 的成分与人类 DNA 碱基序列高度相似,不会引发免疫反应,因此在人体应用中既安全又无不良反应,引起了医美领域的高度关注。它在皮肤修复、焕发青春等方面的护肤治疗中占据重要地位。潘虎团队的研究成果显示,结合强脉冲光使用 PDRN 对面部微血管扩张具有良好的治疗效果,并且具有较高的治疗安全性。而殷珊等人的研究则发现,通过微针技术注射 PDRN 并结合放血疗法,对于治疗红斑性毛细血管扩张型酒渣鼻有显著疗效。
目前研究发现,PDRN 可以通过抑制过度炎症反应、加快表皮及真皮更新、促进胶原沉积以及上调 VEGF 等血管生成调节因子等多角度参与创面愈合过程。在自体皮肤移植患者中,伤口部位使用肌肉注射、皮下注射或外用PDRN均可加快伤口的再上皮化及愈合时间PDRN 与皮肤移植结合时也被证明可以促进伤口愈合,这是利用皮肤替代概念最传统的治疗方法。Kim 等人的研究显示,PDRN 能增加外周组织氧合及肉芽组织形成,促进血管生成,有效改善溃疡愈合。在一项双盲随机对照临床研究中,Squadrito 等人对 216 名 I 型和 II 型糖尿病患者采用安慰剂或 PDRN 治疗,采用肌肉注射和溃疡周围途径治疗 8周后 37.3% 的 PDRN 治疗患者和 18.9% 的安慰剂治疗患者伤口完全愈合。同样,在二氧化碳点阵激光术后使用 PDRN 可加快创面愈合速度,因此,剥脱性激光治疗后可考虑使用 PDRN 以促进创面愈合和皮肤屏障功能恢复。以上研究表明 PDRN 有利于促进伤口愈合。
1.2 头发再生
全球范围内,许多人正遭遇着脱发的困扰,目前普遍采用的治疗手段是自体毛囊移植。这种疗法的前提是患者自身拥有足够的可用毛囊,这对于脱发严重的人来说往往难以实现。
Cho 等研究人员对 8 名患有斑秃的患者进行了一项实验,探究了结合 1927nm 铥激光治疗与毛囊周围注射 PDRN 的疗效。经过一系列治疗,患者的平均发量 [(9.7±7.4)%,P=0.007] 和发丝平均粗细 [(16.1±25.0)%,P>0.05] 均呈现出临床上的好转。通过深入的统计分析,结果显示铥激光与 PDRN 联合疗法对于发丝粗细的提升效果显著(P=0.029),相较于单独使用消酯与 PDRN 结合的疗法效果更为突出 。以上研究表明 PDRN 注射提高了激光治疗脱发的好处。另一项研究是探讨 PDRN 注射液联合富血小板血浆(PRP)治疗对毛发再生的影响。该研究将患者分为两组:一组接受 PRP 和 PDRN 联合治疗,另一组单独接受 PDRN 治疗。结果表明,两组患者的平均头发厚度和头发数量都有改善。两组间的比较分析表明,与 PDRN 治疗相比,联合治疗改善了头发厚度,但没有改善头发数量。这些研究表明在使用 PDRN 治疗后头发健康得到改善。
1.3 肌腱再生
肌腱损伤是主要的肌肉骨骼疾病。PDRN 通过激活腺苷 A2A 受体,可促进组织生长和新生。Kwon DR 在探究PDRN 对慢性创伤性肩袖肌腱撕裂 (FTRCTT) 再生的影响中发现联合注射 UCB-MSC 和 PDRN 比单独注射 UCB-MSC 对于 FTRCTT 再生更有效。Kang SH 等在研究 PDRN 对于大鼠跟腱损伤后肌腱愈合影响的实验研究中证实,在跟腱损伤大鼠模型中,PDRN 可改善各种生长因子的分泌,促进胶原蛋白的合成,并恢复跟腱的拉伸强度。Kyoungho R 等人研究了超声引导下 PDRN 增生注射治疗对于慢性肩袖肌腱病患者的短期疗效,研究表 PDRN 增生注射可在最终注射后 3个月内安全、有效、持续地改善疼痛及肩关节功能障碍。
1.4 骨再生
骨再生,即在骨骼受到伤害或者出现缺损时,恢复其原有形态和功能的过程,一直是再生医疗领域关注的焦点。Kim 团队曾进行实验,将 DDM 与多脱氧核糖核酸(PDRN)溶液混合,然后植入到大鼠背部皮下去观察两者联合应用能否在软组织中促进骨骼形成。由于 PDRN 是液态,需要一个支撑结构,而 DDM 正好提供了这样的支架,因此两者能够有效结合。实验结果显示,PDRN 与 DDM 相结合能显著促进骨组织的再生。此外,Guizzardi 等人研究了 PDRN对于实验室培养的人体成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性影响,研究发现,经过 PDRN(浓度为 100 μg/mL)处理六天后,成骨细胞的生长有了显著提升,增加了 21%。BarbaraBuffoli 的一项研究使用了大鼠颅骨缺损模型。将不同浓度的PRDN 单独使用或与纤维蛋白和 / 或 Bio-Oss 联合使用用于愈合治疗,并通过组织形态学和免疫组织化学分析评估骨愈合过程,实验结果表明 PRDN 在骨再生中具有积极作用,为未来临床评估其成骨特性提供了有用的方案及模型。
2.5 肝再生
肝再生是一个涉及众多细胞类型(如肝细胞、胆管上皮细胞、肝血管内皮细胞等)、其他器官(如脾脏、甲状腺等)以及众多因素(包括能量供应、激素分泌、胆汁酸等)的繁杂过程;这个过程涵盖了细胞增长、分化,细胞代谢的重新编程和多种信号通路的激活;对于肝细胞再生的启动、增长调控以及结束机制的研究,还有新生肝细胞的来源探讨,始终是再生生物学研究中的核心议题之一。研究发现,腺苷 A2A 受体激动剂 PDRN 可通过 NF-κB 失活抑制促炎细胞因子分泌,从而抑制肝细胞凋亡,这为研究 PDRN的肝再生研究提供了理论支持。Yoon KH 等人以增殖细胞核抗原(PCNA)作为细胞增殖的指标,评估 PDRN 对部分肝切除术(PH)诱导的大鼠肝脏再生的影响。研究结果表明,对肝切除大鼠进行 PDRN 治疗可通过快速的细胞增殖加速肝脏再生。
聚脱氧核糖核苷酸在药妆领域有前景的生物活性。PDRN具有许多有价值的生物活性,具有潜在的药用价值,如抗凋亡、抗炎、抗黑色素生成、抗骨质疏松、抗骨坏死、骨再生、抗异常性疼痛、抗溃疡、组织损伤预防和伤口愈合特性。此外,它还显示出优异的性能,使其成为研究和药妆领域有前景的天然药物。PDRN有前景的功能如抗衰老、抗黑色素生成、抗氧化剂、脱发治疗、头发变灰治疗、皮肤再生-伤口愈合和疤痕预防,这些功能可潜在地应用于化妆品。
2.1抗衰老
PDRN的抗衰老能力可直接抑制引起真皮基质降解和激活线粒体生物发生的酶的活性,具有抗衰老能力。弹性蛋白酶和胶原酶是导致皮肤基质(即胶原蛋白和弹性蛋白)降解的关键酶,导致皮肤衰老。有研究表明,在体外试验中,PDRN对弹性蛋白酶表现出良好的抑制作用(50-60%),而抗胶原酶活性不显著。在1000μg/mL的浓度下,PDRN降低了间质胶原酶-MMP1基因的表达,该基因在皮肤1型胶原降解中起着至关重要的作用。此外,PDRN还增加了CCD-986sk细胞的线粒体(mt)DNA含量和线粒体密度。成纤维细胞负责所有类型皮肤细胞的整体状况。PDRN积极参与胶原纤维的生产和排列,这对皮肤的弹性和张力有重大贡献。因此,评估药物对皮肤细胞培养中成纤维细胞衰老的影响可以帮助开发有效的方法来延缓皮肤成纤维细胞与年龄相关的变化。同样,PDRN对皮肤成纤维细胞的存活和生长有积极影响。此外,PDRN支持成纤维细胞的存活能力,并增强其在传代后期的生长能力。
另有研究表明,鲑鱼或鳟鱼的PDRN有助于保护人类皮肤成纤维细胞免受紫外线诱导的DNA损伤。当在UVB照射后以100μg/mL的浓度将PDRN添加到人皮肤成纤维细胞培养基中时,p53蛋白在最初的24小时后被强烈激活,并提高了CPD修复率,表明损伤修复水平更好。
2.2.抗色素沉着能力
适当的黑色素生成调节对于维持皮肤健康至关重要。黑色素生成是通过黑色素生成酶调节的,如酪氨酸酶,酪氨酸酶相关蛋白(TRP1和TRP2)。一种名为小眼症相关转录因子(MITF)的关键转录因子在黑色素生成中诱导这些酶。在一项研究中,PDRN可以剂量依赖性地抑制蘑菇中的酪氨酸酶。在500-1000μg/mL的浓度下,也抑制了小鼠黑色素瘤细胞(B16-F10)中的细胞酪氨酸酶30-40%。此外,细胞内黑色素含量和细胞黑色素水平显著下降。本研究进一步表明,PDRN可以降低B16-F10细胞中黑色素生成相关基因的表达,包括酪氨酸酶、MITF、TRP1和TRP2。研究了PDRN和Placentexb(一种含有PDRN的市售产品)对人类黑素细胞-角质形成细胞和小鼠黑素细胞(Mel-Ab)皮肤黑素生成的影响。值得注意的是,在两种测试的细胞类型中,两者都以剂量依赖的方式减少了黑色素的合成,并将Mel-Ab细胞内酪氨酸酶的活性抑制到<40%。此外,两者还可以降低黑素生成相关蛋白的水平,如酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1、TRP-2和酪氨酸酶,持续24-72小时。PDRN还可以调节黑色素生成相关的信号分子,如细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、AKT和糖原合酶激酶3β。在一项针对面部色素沉着过度女性的临床试验中,几乎所有患者在注射Placentex后都显示出10%或更多的明显改善。因此,含有PDRN-Placentex的商业产品的临床疗效被发现有助于治疗色素沉着过度。这也是美容行业中广泛商业化的产品。
2.3抗氧化能力
氧化应激会严重影响皮肤健康,导致衰老、色素沉着过度和其他疾病。因此,保护皮肤免受氧化应激也是一种很好的护肤方法。它在细胞外基质蛋白稳态、线粒体生物合成和黑色素生成中起着关键作用。自由基也与氧化应激密切相关;因此,通过清除这些自由基来研究抗氧化能力也很常见。其中,清除2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基的活性是一种简单、快速、经济、流行的测量抗氧化能力的方法。此外,一些其他自由基清除剂,如ABTS和羟基也被用于测定抗氧化能力。线粒体功能障碍也会导致皮肤疾病。因此,线粒体含量对皮肤细胞的代谢平衡也至关重要。细胞氧化应激可导致氧化损伤和线粒体DNA突变,这些已被证实是导致衰老相关疾病的致病因素。
自由基清除试验和一些预防线粒体氧化应激的试验表明,PDRN是一种很好的抗氧化剂。在体外试验中,鲑鱼油中的PDRN在100-1000μg/mL时表现出高达100%的DPPH自由基清除效率。此外,用1000μg/mL的PDRN处理B16-F10细胞也会导致黑素细胞中的线粒体生物合成,可能会显著增加线粒体DNA含量和线粒体密度。PDRN表现出最高的羟自由基清除能力,IC50值最低为0.173 mg/mL,对DPPH(5.896 mg/mL)和ABTS(4.573 mg/mL)的清除能力中等。PDRN处理正常RAW264.7细胞在100-600μg/mL时没有毒性,事实上,在200-600μg/mL时促进了细胞增殖。在H2O2诱导的RAW264.6细胞模型中,PDRN在600μg/mL下可以保护这些细胞免受氧化损伤并提高其存活率,存活率接近126.8%。此外,在600μg/mL下,它还提高了有益抗氧化指标的含量,如超氧化物歧化酶(53.18%)、过氧化氢酶(69.77%)、谷胱甘肽(38.76%),并降低了有害的丙二醛含量。超氧化物歧化酶是细胞内最有效的酶之一,具有清除超氧阴离子自由基和H2O2的能力,从而缓解细胞内氧化应激。PDRN具有良好的抗氧化作用,在保护皮肤免受氧化应激的有害影响方面具有广阔的应用前景。
2.4.对脱发和头发变白的治疗能力
研究表明,PDRN在改善脱发或头发变白方面的效率较高。它被用作一种联合疗法,治疗了12次脱发。与联合PDRN注射和介导治疗(治疗2)相比,通过毛囊内注射PDRN和铥激光能量治疗(治疗1)的联合治疗在临床上显著改善了脱发;其中,治疗1和2分别使平均毛发数量增加9.7%和20.4%,平均毛发厚度分别增加16.1%和53.1%。在另一份报告中,注射自体富血小板血浆(APRP)和/或PDRN也可改善女性脱发患者的密度和毛发厚度。接受APRP和PDRN联合治疗的患者组在毛发厚度方面有更好的改善,但在毛发数量方面没有改善,平均毛发数量为23.2%,厚度为16.8%。在12次疗程后,单次注射PDRN的患者头发数量也增加了17.9%,头发厚度增加了13.5%。对于男性脱发和白发治疗,据报道,铥激光和PDRN注射的组合可增加色素毛囊数量,从而在12次治疗后改善头发变白。一般来说,PDRN注射被认为是一种有效的联合疗法,可以在相对较短的治疗时间内改善一些与头发相关的问题。临床试验报告称,这是一种安全的治疗方法,没有副作用。
2.5.皮肤再生
伤口愈合能力也因其显著改善皮肤屏障、皮肤再生和伤口愈合的能力而闻名。因此,这一功能有助于防止皮肤衰老、疤痕形成和其他有害问题,这些都是美容行业非常关注的问题。通过直接注射评估PDRN对皮肤移植患者的伤口愈合效果。结果14天后,再上皮化率为58.6%,21天后完全临床愈合。没有记录到明显的副作用,疼痛症状也有所减轻。
在一项研究中,PDRN水凝胶复合物显示出比对照组(仅应用水凝胶)更高的效率。在该报告中,治疗21天后,伤口大小从256mm2变为0.5mm2,成纤维细胞/mm2的平均数量从5.7增加到13,胶原纤维/mm2的均值从0增加到25.3。应用包含左旋肉碱、蛋白水解酶、钙离子和其他成分的PDRN特殊组合,导致成纤维细胞中伤口愈合标志物的显著增加,包括I型和IV型胶原蛋白以及细胞角蛋白1、5、10和14。
2.6.疤痕预防能力
发达国家每年约有1亿患者会留下疤痕。其中,痤疮是皮肤瘢痕形成的主要原因之一。因此,对预防和治疗疤痕的药妆产品的需求非常高,使其成为美容行业的一个重要市场。因此,能够预防和治疗疤痕的活性成分的研究和开发引起了越来越多的关注。一名女性患者接受了皮下注射PDRN与其他药物的联合治疗,以改善疤痕。通过这种相对便宜的联合治疗,6个月后,术后致残疤痕得到了显著改善,患者表示完全满意,取得了意想不到的成功结果。在接受背部皮肤切除的Sprague-Dawley大鼠中评估了PDRN的皮肤修复能力。腹膜内注射PDRN 3或7天后,记录到瘢痕大小、瘢痕组织中炎性细胞的平均数量和高迁移率族蛋白盒1(HMGB-1)蛋白表达的减少。此外,PDRN还被证实通过抑制HMGB-1的表达来发挥胶原蛋白合成和抗炎活性,从而促进伤口愈合,防止瘢痕形成。
此外,PDRN还被证实通过抑制HMGB-1的表达来发挥胶原蛋白合成和抗炎活性,从而促进伤口愈合,防止瘢痕形成。通过皮内注射0.05 mL 2%鲑鱼PDRN(注射间隔约0.5-1.0 cm)并结合其他疗法,有效治疗了糖尿病患者5×3 cm的增生性瘢痕。在连续3个月每2周注射PDRN并联合治疗后,瘢痕治疗进展明显改善,温哥华瘢痕量表从10降至3。另一项临床试验旨在评估早期注射PDRN预防术后瘢痕形成的效果。三个月的PDRN治疗降低了温哥华疤痕评分、红斑指数和黑色素指数。本研究为PDRN治疗减少术后伤口红斑提供了新的证据。值得注意的是,没有发现副作用。因此,术后早期注射PDRN是治疗和预防增生性瘢痕的有效和安全的疗法。在一名有瘢痕的男性患者身上测试了PDRN治疗萎缩性痤疮瘢痕的效率。治疗结束时,全球痤疮疤痕系统评分从21分降至15分。在这种治疗组合中,PDRN有助于促进伤口愈合,滋润表皮,预防色素沉着。
PDRN在食品中应用较少。
多聚脱氧核糖核苷酸(PDRN)是一种核酸物质,具有DNA的基本结构,含有磷、脱氧核糖等成分,因为本品为DNA的钠盐,因此也具有钠的特性。
1.1 磷鉴别
1.1.1试剂
钼酸铵试剂:依次量取1体积25 g/L钼酸铵溶液、1体积100 g/L抗坏血酸溶液、1体积294.5 g/L硫酸溶液置于容器中,再加入2体积纯水,混匀。该试剂必须在20-30min内使用。
供试品:准确称取供试品0.03g(折干)至100ml纯化水中,快速振荡分散约10min,放入摇床中溶解2-3h(转速150-200rpm,温度25℃),观察溶液状态,无肉眼可见不溶物后将容量瓶放入2-8℃冰箱内放置过夜,次日拿出后30摄氏度水浴恢复室温后定容进行检测。
1.1.2检测
①消解:管中加入精密量取的供试品溶液1.0 ml。向各管中加入0. 2 ml硫酸溶液,在120 ℃油浴中加热1 h,然后升温至160 ℃加热(约1 h)。加入0.1 ml高氯酸溶液于160 ℃加热有白烟冒出,直到溶液脱色(约90 min)。
②冷却后,向每管中加入纯水和钼酸铵试剂各4 ml。在37 ℃水浴中加热90 min,供试品溶液呈浅蓝色或蓝色。
1.2 钠鉴别
1.2.1试剂
碳酸钾溶液:将15g碳酸钾荣誉100ml纯化水中,振荡至完全溶解。
焦锑酸钾试液:20mg/ml
供试品:取供试品约50mg,置20ml试管中,加水2ml溶解。
1.2.2检测
向装有供试品2ml的试管中加1.5%碳酸钾溶液2ml,加热至沸腾(时间维持约10min), 不得有沉淀生成;加焦锑酸钾试液4ml,加热沸腾(约10min);至冷水中冷却,必要时用玻璃棒擦拭试管内壁,有致密的沉淀生成。
1.3 脱氧核糖鉴别
1.3.1试剂
二苯胺溶液:将1g二苯胺溶于100毫升冰醋酸中,加入2.75毫升硫酸。
待测溶液:准确称量0.050g待测物质(干重)溶解在10毫升水中。
1.3.2 检测
在试管中加入1毫升待测溶液。加入2毫升二苯胺试剂。将试管放入沸腾的水浴中加热几分钟。脱氧-2-D-核糖呈深蓝色。
1.4 核酸鉴别
1.4.1 供试液溶液的制备
精确称取供试品0.1g,置于100ml容量瓶中,加TE缓冲液(取三(羟甲基)氨基甲烷605.7mg,乙二胺四乙酸二钠186.12mg,加500ml水溶解,用稀盐酸调节pH值至8.0)溶解并定容。精确量取上述溶液4 ml,置于100ml容量瓶中,加TE缓冲液混匀并定容,制成每1ml约含0.04mg的供试溶液。
1.4.2 测定
取供试溶液,在200nm~400nm波长处使用紫外分光光度计进行全波长扫描,记录紫外吸收峰最高处波长,和260nm、280nm处吸光度数值。
最大吸收应在258 nm~262 nm处,且260nm处与280nm处吸光度比值应为1.8~2.0。
PDRN为纯度大于95%的DNA纯品,可以用紫外吸收法对其含量进行检测,磷为DNA中的特征结构,且在整个产品中占比相对固定,可以使用磷含量表征DNA的含量。
2.1 DNA含量
2.1.1 供试液溶液的制备
准确称量0.100g供试品于100ml容量瓶,使用TE缓冲液(取三(羟甲基)氨基甲烷605.7mg,乙二胺四乙酸二钠186.12mg,加500ml水溶解,用0.1M盐酸调节pH值至8.0)溶解并定容,终浓度为1mg/ml。取上述1mg/ml溶液4ml于100ml容量瓶,使用TE缓冲液稀释并定容,制成浓度40 μg/ml的溶液,即为供试品溶液。
2. 1.2 测定
取供试品溶液,在200nm~400nm波长处使用紫外分光光度计进行全波长扫描,记录紫外吸收峰最高处波长计算含量。
2. 1.3 计算方法
以下述公式进行计算DNA含量:
N为50,当紫外吸收峰最高处波长吸光度=1时:dsDNA浓度约为50μg / ml。
c为供试品浓度,μg/mL
“OD值”为紫外吸收峰最高处的吸光度。
h为样品的干燥失重,%。
2.2 磷含量
2.2.1 溶液配制
2.2.1.1 100µg标准磷溶液配制
精密称取已干燥至恒重的磷酸二氢钾219.4mg,置于500ml容量瓶中,加纯化水溶解至稀释至刻度,摇匀,配成100µg/ml 标准磷溶液。
2.2.1.2 钼酸铵试剂的配制
依次量取1体积25 g/L钼酸铵溶液、1体积100 g/L抗坏血酸溶液、1体积294.5 g/L硫酸溶液置于容器中,再加入2体积纯水,混匀。该试剂必须在20-30min内使用。
2.2.2 测定
标曲:分别精密量取100 μg/ml标准磷溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml置于试管中,各补加纯水至5 ml。空白管中加入5 ml纯水。
2.2.3 供试品:
①消解:管中加入精密量取的供试品溶液1.0 ml。向各管中加入0. 2 ml硫酸溶液,在120 ℃油浴中加热1 h,然后升温至160 ℃加热(约1 h)。加入0.1 ml高氯酸溶液于160 ℃加热,有白烟冒出,直到溶液脱色(约90 min)。
②冷却后,向每管中加入纯水和钼酸铵试剂各4 ml。在37 ℃水浴中加热90 min,冷却。用纯水定容至10 ml,混匀。
③测定:用紫外分光光度计于820nm下测定反应溶液的吸光度A。以标准品绘制标准曲线,计算供试品中磷含量。
多聚脱氧核糖核苷酸(PDRN)是由磷酸二酯键连接的脱氧核糖核苷酸单体组成的线性聚合物(由嘌呤、嘧啶核苷酸呈现);为不同长度的脱氧核糖核苷酸链的混合物。根据链的长短不同,嘌呤、嘧啶核苷酸的数量不同。
PDRN 的碱基长度在 50~2000 bp,其中包含 50%双链脱氧核糖核苷酸,两条聚脱氧核糖核苷酸通过碱基对之间的氢键相连(腺嘌呤(A)=胸腺嘧啶(T);鸟嘌呤(G)=胞嘧啶(C)),最终形成双螺旋结构 。决定生物的多样性的就是脱氧核苷酸中四种碱基 (A,T,G,C)排列顺序的不同。
链的长短和碱基序列的排列顺序均影响PDRN的分子量,其平均分子量一般在 50-1500kDa 之间,该分子量段是促进伤口愈合的最佳 PDRN 大小。700KDa 以上用于皮肤再生、关节软骨再生及促进骨骼形成; 350~500 KDa 用于医药品治疗以达到组织再生、角膜再生及治疗肌肉骨骼疾病, 40~60 KDa 用于化妆品及食品达到修复屏障、改善皱纹及皮肤美容的作用等。
PDRN为白色或类白色颗粒或粉末,可溶于水,不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂。
PDRN是一种大分子的核酸类物质,具有大分子物质的特性,如高分子量、强吸水性及良好的生物相容性等。在一定浓度和一定分子量下,PDRN水溶液具有很好的粘弹性,可以在组织内起到很好的支撑作用。
PDRN在高温、高湿、光照条件下,产生不同程度的变化。高温条件对PDRN具有明显的破坏性,光照、高湿条件对PDRN有轻微破坏性,且高湿条件下PDRN状态较差,出现部分板结。因此,PDRN在上述条件下不稳定,在生产、运输、储存过程中应避免高温、高湿和长时间日光直射。
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