衰老是生命进程中不可避免的生理现象。随着年龄增长，细胞逐渐丧失增殖潜能并累积功能缺陷，进而引发多种衰老相关疾病。科学界持续探索延缓衰老的策略，包括热量限制、衰老细胞清除及基因治疗等。然而，如何在安全、可控的前提下有效逆转衰老状态，仍是当前领域面临的重大挑战。
2025 年，Cell Metabolism 发表了一项突破性研究，题为《Exosomal miR-302b rejuvenates aging mice by reversing the proliferative arrest of senescent cells》。研究发现，一种来源于人胚胎干细胞外泌体的 microRNA——miR-302b，能够恢复衰老细胞的增殖能力，从而显著延缓小鼠的衰老进程。这为未来皮肤抗衰老干预提供了新的思路。
科学家们在一项令人兴奋的研究中发现，人类胚胎干细胞来源的外泌体（hESC-Exos）拥有让衰老细胞“重返青春”的强大能力。研究人员选取了人类成纤维细胞IMR-90作为研究对象。这种细胞在分裂大约50代后会进入不可逆的衰老状态，停止增殖。实验将这种衰老细胞分为两组，一组用hESC-Exos进行处理，另一组作为对照。72小时后，观察到经hESC-Exos处理后的衰老IMR-90细胞表现出多方面的“年轻化”逆转特征：衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性降低（图1a），衰老及相关分泌表型（SASP）基因（如CDKN2A、CDKN1A、IL-1a、IL-11和CCL20）的表达下调。在群体倍增实验中，细胞增殖能力明显增强，增殖标志物Ki67的表达量上升（图1b），处于S期的细胞比例也显著提高（图1c）。进一步的RNA测序（RNA-seq）分析显示，hESC-Exos显著抑制了衰老相关基因（如TP53、IL-6、CDKN1A和CDKN2A）的表达，同时促进了增殖相关基因（包括MKI67、PCNA、TOP2A和CDK1）的表达（图1d）。差异表达基因（DEG）功能注释表明，上调基因多与有丝分裂细胞周期和细胞周期进程相关，而下调基因则富集于细胞衰老和炎症反应通路。基因集富集分析（GSEA）进一步证实，hESC-Exos处理增强了细胞周期相关通路的富集程度。这些结果一致表明，hESC-Exos能够使衰老的IMR-90细胞恢复年轻状态，并重新获得增殖潜力。
为了在单细胞层面上看清hESC-Exos究竟如何让衰老细胞“重获新生”，研究人员通过将黄色荧光蛋白（YFP）基因插入 CDKN1A（编码 p21）终止密码子下游构建了一个“衰老报告系统”：当细胞衰老时发出荧光，这样就可以轻松地找到并分离出这些衰老细胞。当用hESC-Exos处理这些衰老细胞后， YFP 信号和 SA-β-gal 活性被抑制，同时，代表增殖能力的Ki67蛋白信号增强。更直观的是，活细胞成像直接捕捉到，部分原本“躺平”不分裂的衰老细胞，在治疗后重新开始了增殖分裂，说明hESC-Exos使部分衰老细胞重新进入增殖过程。单细胞 RNA 测序分析显示，hESC-Exos处理组中处于DNA合成期（S期）的细胞比例增加了17%（图2a）。
根据已报道的增殖和衰老标志物对细胞簇进行注释，将MKI67和PCNA高表达的细胞定义为 rejuvenated 细胞（Rej），CDNK1A和TP53高表达的细胞为衰老细胞（Sen），其余为中间状态细胞（Int）。结果显示，与Dox-PBS
hESC-Exos 治疗可逆转老年小鼠的衰老表型并部分恢复其增殖能力。在老年小鼠中，hESC-Exos 处理显著延长了中位和最大寿命，改善了毛发稀疏、运动能力下降、认知功能障碍等衰老相关表型，并降低了血清中促炎细胞因子（如 IL-1β、IFN-γ、IL-6 和 TNF-α）的水平。组织学分析显示，hESC-Exos 减少了衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β
从机制上讲，通过肝脏和皮肤组织的单细胞转录组分析发现，hESC-Exos 处理恢复了衰老组织中S期细胞比例，并鉴定出一组被称为“救援细胞周期相关基因（rescue CCGs）”的关键基因。其中，Cdkn2a、Cdkn1a、Cdkn1b 和 Ccng2 表达下调，而 E2f1、Mki67
hESC-Exos 封装了参与衰老过程的多种生物活性物质，那么具体那个核心物质起到作用呢？作者通过高通量测序发现miR-302b-3p在hESC-Exos中显著富集。通过绝对定量PCR测定，其浓度被精准定标为每1000个hESC-Exos颗粒中含（306 ± 50.6）pmol。
为进一步解析其功能机制，我们通过Ago2 Clip-seq分析鉴定出miR-302b的靶基因，并发现其结合位点与miRanda和TargetScan预测结果高度重叠。基因本体（GO）分析显示，这些靶基因主要富集于有丝分裂细胞周期、细胞分裂和DNA损伤应答等过程。值得注意的是，miR-302b与Cdkn1a和Ccng2
为验证miR-302b单独是否足以逆转衰老，作者在PDL50 IMR-90衰老细胞中转染miR-302b模拟物。结果显示，过表达miR-302b可显著降低SA-β-gal活性，提高S期细胞比例，并下调p21和Ccng2的蛋白水平。综上所述，作者推断
为探究miR-302b的体内 rejuvenation 效应，研究通过电转将miR-302b模拟物装载至293F细胞来源的外泌体中，构建Exos-302b递送系统。25月龄老年小鼠经Exos-302b连续干预5个月后，多项衰老表型得到显著改善：背部毛发再生增强、体重增加、运动协调能力（转棒实验）和抓力明显提升，空间学习与记忆能力（水迷宫实验）也显著优于对照组。
在分子层面，miR-302b干预有效缓解了老年小鼠的全身慢性炎症状态，并减少多个组织（肾、肝、肺、脾、皮肤）中衰老相关β-半乳糖苷酶阳性细胞的积累。此外，组织DNA损伤标志物γ-H2AX表达下降，而基因组稳定性标志物H3K9me3表达上升。绝对定量PCR显示，miR-302b在肝、皮肤及脑组织中大量富集，免疫荧光染色进一步证实其有效抑制了关键细胞周期检查点Cdkn1a和Ccng2
长期安全性评估表明，miR-302b干预显著延长老年小鼠中位寿命达137天（增加约15.4%），死亡风险比（HR）降至38%，最大寿命也显著延长。尽管寿命显著延长，两组小鼠在肿瘤发生率、疾病负担和死亡原因方面均无显著差异。病理学分析显示，miR-302b减轻了多器官的年龄相关性组织病变，包括皮肤角质化减少、脾脏白髓萎缩缓解等，并使增殖标志物Ki67的表达恢复至接近年轻小鼠水平。多组织转录组分析进一步表明，miR-302b能广泛恢复增殖相关信号并抑制炎症反应通路。因此，长期递送
